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Práctica nº 5. Obtención de inóculo esporal y vegetativo. (Inóculo vegetativo encapsulado: proceso, producto)

1.- Protocolo para la obtención de inóculo esporal:

La elaboración de inóculo esporal puede realizarse a partir de carpóforos frescos o secos. Básicamente consiste en preparar una solución de esporas  o mezclarlas con otro agente transportados que facilite la manipulación de las esporas para la aplicación (arena, arcilla, ...).

1.- En fresco, se escogen los carpóforos de una especie concreta (son muy adecuados los carpóforos de aquellas especies que contienen un gran número de esporas), y con ayuda de una cuchilla se separa el himenio y se deposita en un mortero.

2.- Se trituran los himenios hasta obtener una pasta homogénea

3.- La pasta resultante se vierte en un vaso de precipitados, se le añade agua destilada y se agita bien para homogeneizar la mezcla. La proporción debe ser de 3 partes de agua por 1 de himenio machacado. Ej.: si la pasta conteniendo las esporas ocupa 1 ml, debemos añadirle 3 ml de agua destilada

4.- Esta mezcla se filtra a través de una tela de algodón fina para eliminar los restos de tejido fúngico y reservar sólo las esporas

5.- Una vez elaborado el inóculo esporal puede incorporarse al agua de riego, quedando así el sustrato de los contenedores impregnado de esporas que, al germinar, pueden infectar las raíces y formar micorrizas.

Trabajando con carpóforos secos, el proceso es el mismo con la particularidad de que es preciso evitar la pérdida de esporas triturando los carpóforos secos dentro de una bolsa y facilitar la homogeneización de solución mediante la adición de un agente humectante (las esporas son hidrófobas).

Para obtener buenos resultados hay que tener en cuenta la compatibilidad de la simbiosis y utilizar esporas de hongos que previamente se sepa que tienen capacidad de infectar a las plantas que nos interesa micorrizar, así como el tiempo de viabilidad de las esporas. Para conseguir una concentración determinada (que debe oscilar 10 ⁵ - 10 ⁷ esporas por ml) se cuenta el número de esporas de la solución madre utilizando una cámara de recuento (cámara de New Bauer). A partir de la solución madre, se obtiene la concentración requerida mediante dilución. La solución obtenida tras la dilución, está lista para usar como inóculo esporal.

2.- Protocolo para la obtención de inóculo vegetativo o micelial

Existen varios modos de preparar un inóculo vegetativo, dos de los más utilizados son: Inóculo micelial en cultivo líquido encapsulado en alginatos e Inóculo micelial en sustrato sólido (turba+vermiculita estéril).

2.1.- Encapsulado en alginatos

Es necesario disponer de micelio de un hongo aislado en cultivo puro y hacerlo crecer en un medio líquido. Una vez que se ha desarrollado el micelio, se bate para fragmentar y homogeneizar la mezcla. A continuación se mezcla con una disolución de alginato sódico (2% peso/volumen en agua destilada estéril) y se vierte gota a gota sobre cloruro cálcico Como resultado se obtienen fragmentos de hifas encapsulados en un gel de alginatos que varían en tamaño de 0’5-2 mm de diámetro

2.2.- Inóculo micelial en sustrato sólido

El sustrato sólido está formado por turba y vermiculita estéril. A este sustrato base se le añade un medio líquido MNN que aporta los nutrientes necesarios para el crecimiento del hongo; luego se incorporan fragmentos de micelio procedente de cultivo puro en placa y se dejan crecer en ese sustrato. Posteriormente se mezcla el sustrato inoculado con sustrato estéril que puede emplearse como fuente de inóculo.

Fuente de las ilustraciones de la elaboración del inóculo esporal y micelial (de Brundrett & col. 1996, modificado)  

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Créditos: Para citar esta fuente :  ACEDO C. 2004-2008 Botánica en la web: http://www3.unileon.es/personal/wwdbvcac/index.htm

   Se actualizó por última vez el 10-feb-2008.