Protocolo para el aislamiento de esporas

1- Se toma una muestra superficial de suelo procedente de una zona donde abunden las endomicorrizas, como un pastizal, jaral, ...

2- Se retiran las piedras o partículas mayores de 2 mm manualmente

3- Si el suelo está seco es necesario humedecerlo durante al menos 30 minutos antes de tamizarlo.

4- Se mezcla el suelo con una cantidad considerable de agua y se decanta a través de tamices con distinto tamaño de poro, dejando unos segundos para que las partículas pesadas se depositen. Este proceso de lavado y decantación se repite hasta que el agua salga limpia. Las raíces y restos mayores son recogidos en el tamiz de 0.800 mm, mientras que las esporas quedan retenidas en los tamices más finos, de 0’250, 0’100 y 0’040 mm respectivamente. Es necesario asegurarse de que los agregados de suelo han sido separados a parte.

5- El material obtenido anteriormente se deposita en tubos de centrifuga que han de ser marcados para identificar cada parte del suelo tamizada. Por ejemplo, podemos llamarle A la muestra retenida en el tamiz de 0’250 mm, B a la muestra retenida en el tamiz de 0’100 mm  y C a la del tamiz de 0’040 mm

6- Se introducen los tubos en la centrífuga procurando que quede equilibrada antes de ponerla en marcha, y se centrifuga durante 5 minutos a 2000 revoluciones por minuto.

7- Eliminar cuidadosamente el sobrenadante y volver a resuspender el sedimento  en una solución de sacarosa al 50 %

Protocolo de aislamiento de esporas de hongos arbusculares del suelo (Fuente: Brundrett et al. 1996)

8- El material sedimentado: suelo + esporas es suspendido con ayuda de un bastón de vidrio

9- Centrifugar de nuevo durante 1 minuto a 2000 R.P.M. para separar las esporas y los restos orgánicos que puedan quedar de los componentes del suelo más densos.

10- Inmediatamente, tras centrifugar la muestra, se coloca el sobrenadante con las esporas de cada tubo (A, B y C) por separado sobre un filtro depositado sobre  un embudo Buchner acoplado a un kitasato, se conecta a una bomba de vacío y se lava cuidadosamente para eliminar los restos de sacarosa.

11- El papel de filtro puede estar previamente marcado con líneas separadas 7 mm entre sí para establecer campos de recuento en el microscopio. Finalmente utilizaremos placas Petri para depositar los papeles de filtro con esporas que observaremos a la lupa

(Fuente : imagen de Brundrett et al. 1996)

Desarrollo y características de las esporas de algunos Glomales

Félix Llamas y Carmen Lence han colaborado en la realización 

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